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L’inguaribile sognatore Larry Daley (Ben Stiller) ha trascorso anni, sperperando energie e denaro, per inseguire idee stravaganti e progetti senza futuro. Larry, per riguadagnarsi la stima del figlio Nick, decide di accettare un lavoro di custode al Museo di Storia Naturale di New York. Armato di torcia extralarge e di un manuale d‘istruzioni, si appresta a trascorrere la sua prima notte al museo, ma ancora non sa quali incredibili e straordinarie avventure lo attendono quando animali e statue, magicamente, prendono vita, creando un gran caos. Larry dovrà superare la notte e riportare un po’ di tranquillità nel museo vivente.